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免疫親和柱有著怎樣的使用要點？

更新日期：2022-01-14 信息來源：本站瀏覽次數(shù)：1890

　　免疫親和柱的原理：

　　本實驗測定的基礎是抗原抗體間的特異性反應。單克隆抗體被偶聯(lián)在柱內凝膠上，樣品中的經(jīng)過提取、過濾、稀釋；然后將樣品提取液通過鍵合有抗體的親和柱。
此時，鍵合在親和柱中的抗體上。之后用蒸餾水將親合柱上的雜質除去。用甲醇洗脫親和柱，將從抗體上分離下來。將過濾的甲醇溶液注入熒光計或HPLC進行測定。

　　特點：

　　1、采用定向偶聯(lián)技術，抗體載量大，有效柱容量高。所有親和柱產品柱容量均滿足國標對于商品化柱容量的要求；

　　2、凝膠粒徑均勻，過柱自然流速即可，不需額外加壓；

　　3、采用抗體定向偶聯(lián)技術，樣本回收率高；

　　4、操作簡便，可洗脫后直接進樣，無需氮吹。

免疫親和柱

　　免疫親和柱的使用要點：

　　1、上柱的樣品溶液應該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高；

　　2、若樣品為復雜樣品，例如高蛋白、高油脂、酸性樣品，可以將提取液分兩次提取樣品，可以提高提取效果；

　　3、樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴；

　　4、抗原抗體發(fā)生反應的最佳溫度是在25℃左右，實驗需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會對回收率有一定的影響。在使用前需要恢復至室溫再進行實驗；

　　5、不要在無水狀態(tài)下，瓊脂容易干燥萎縮，影響質量；

　　6、儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因為緩沖液凍結，會嚴重影響親和柱內的物理結構，對質量影響很大；

　　7、洗脫一般選擇試劑甲醇，為增強洗脫效果可加大甲醇體積；

　　8、樣液免疫凈化后，洗脫液過0.45um或更小孔徑濾膜效果更好。

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